如何選擇DNA提取方法

2023-10-25 DNA的提取可以簡單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細胞結構，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質分離的過程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質的有效手段，但如果蛋白質含量超過了其飽和度，裂解體系中的蛋白質就不會被一次性去除，需要進行多次反復抽提，而每次的抽提均會導致核酸的損失。酚氯仿抽提的優勢是成本低廉，對實驗條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽...

熒光原位雜交（FISH）的實驗步驟是什么？

2023-10-24 熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實驗步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、實驗材料準備1.實驗用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細胞標本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養箱、染色缸...

蛋白表達的常見問題有哪些？

2023-10-24 蛋白表達實驗的時，有時候實驗會覺得參考實驗方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結果。下面讓我們一起來看看蛋白表達的常見問題有哪些吧！1、載體構建錯誤，很多克隆新人經常弄錯讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點常有一兩個堿基的區別；另外有些酶產生粘端有些酶產生平端，這些都容易導致讀碼框錯誤，從而表達不出來。2、宿主菌選擇不當，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇合適的宿...

PCR反應體系主要是什么？

2023-10-23 你知道PCR反應體系主要包含那些嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板（template)模板即擴增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高，但應盡量不含有對PCR反應有抑制作用的雜...

PCR技術的基本原理、各步驟的目的是什么？

2023-10-23 你知道PCR技術的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、PCR技術基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內DNA的半保留復制過程，以擬擴增的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系，經過重復地變性一退火一延伸三步，擴增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應體系的溫度來實現。PCR包含下列三步反應：1、變性(denaturation)將反應體系混合物經加熱至94...

如何選擇免疫組化中的一抗？

2023-10-20 免疫組化實驗看似容易，但真想把結果做漂亮，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經驗。一味按照網上操作流程來做，結果往往并不理想，最終結果未能達到預期的效果。那么如何選擇免疫組化實驗中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學基團稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機體多個B細胞克隆產生針對多種抗原表位的抗體，就是...

細胞胞內染色操作流程是什么？

2023-10-20 你知道細胞胞內染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細胞計數將培養好的細胞收集于15mL離心管并計數；500g離心4min，去上清。二、制備單細胞懸液將收集的細胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個細胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細胞固定劑重懸細胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5m...

免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些？

2023-10-19 免疫細胞化學(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來檢測細胞內靶抗原的技術。那么你知道免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細胞培養/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進一步降解，組織形態和結構被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩定在接近invivo狀態。二、通透處理通透即為對細胞膜進行打孔處理，使抗體能進入到細胞中和抗原發生結合。通...