免疫組化實驗流程有哪些？

2023-10-09 你知道免疫組化實驗流程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣品制備1.組織固定：根據要求收集人或動物的組織用于IHC分析，沖洗并用固定劑（一般用甲醛）進行固定2.組織包埋：將經甲醛固定的組織嵌入石蠟，以長期保持其天然形狀和組織結構3.切片安裝：將組織樣品在切片機上切片，并轉移至載玻片上干燥保持其形態4.脫蠟水化：因切片上的石蠟會妨礙染色，所以需將切片上的石蠟溶出，并水化。脫蠟或水化不全容易造成非特異性背景著色（一般的脫蠟水化步驟是：將切片依次浸入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10...

巨噬細胞的提取和分離方法是什么？

2023-10-09 巨噬細胞是機體免疫系統的重要細胞成分，具有抗感染、抗腫瘤和參與免疫應答、免疫調節等生物學功能。腹腔巨噬細胞多游離存在于腹水中易于獲得。因此，可以通過向小鼠腹腔內注射刺激物制造無菌炎癥環境以積聚巨噬細胞，來進行巨噬細胞研究。那么巨噬細胞的提取和分離方法是什么呢？讓我們一起來看看吧！一、材料小鼠，SPF級，體質量18～22g，雄性，6～8周齡。二、肉湯制備1.6%淀粉肉湯制備將1.0g胰蛋白胨、0.3g牛肉浸膏和0.5g氯化鈉放入盛有100mL雙蒸水的燒杯中，置于磁力攪拌器常溫溶...

免疫熒光實驗流程有哪些？

2023-10-09 免疫熒光是一種常用的光學顯微術，即用熒光顯微鏡來觀察細胞中的特定生物分子。免疫熒光依賴于抗體抗原的特異性結合，然后通過直接標記或間接標記方法使用熒光分子指征抗體-抗原結合的位置，以確定目標生物分子在細胞中的位置、豐度和分布情況。那么你知道免疫熒光實驗流程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.固定固定液種類：有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酮等）；交聯劑（4%PFA、10%中性福爾馬林），固定液的選擇取決于被研究抗原的性質及所用抗體的特性。但針對磷酸化的抗體，不適合用甲醛，會導致磷酸蛋白從...

如何區分細胞凋亡與壞死？

2023-10-09 細胞凋亡(Apoptosis)是生物界廣泛存在的一種現象，與其它的生命現象一樣具有同等重要的生理學或病理學意義。盡管其最終結果也是導致細胞死亡，但其誘導因素、發生機制和過程及意義均明顯不同于一般的病理性細胞死亡。那么我們該如何區分細胞的凋亡與壞死呢？讓我們一起來看看吧！細胞凋亡的形態特征與細胞壞死性死亡的形態特征不同。細胞壞死性死亡是被動的病理性死亡，其形態特征首先是膜通透性增加，細胞外型發生不規則變化，內質網擴張，核染色質不規則移位，進而線粒體及核腫張，溶酶體破壞，細胞膜破...

DNA轉染有何注意事項？

2023-10-08 轉染是生物學實驗中常用的實驗技術，那么你知道DNA轉染有何注意事項嗎？讓我們一起來看看吧！一、質粒DNA轉染注意事項1.啟動子的選擇啟動子的選擇對于轉染基因的有效表達是非常重要的。對于轉染過程本身雖然無甚影響，但是對轉染結果卻有著微妙的影響。2.質粒的大小和質量線性化還是超螺旋會影響轉染結果：超螺旋質粒的轉染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時轉染。而線性化DNA轉染的整合幾率高。質粒太大了轉染會困難一些。畢竟，相對致密、較小的外源異物被細胞內吞的幾率要大一些。如果你的質粒正好...

原代細胞轉染的注意事項有哪些？

2023-10-08 你知道原代細胞轉染的注意事項有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.選擇合適的轉染試劑原代細胞對不同的轉染試劑有不同的敏感性和穩定性。因此，在選擇轉染試劑時，需要根據細胞類型和實驗需求進行篩選。2.優化細胞密度不同的原代細胞對細胞密度的要求不同，過低或過高的細胞密度可能會影響轉染效率。因此，在轉染前需要通過培養時間和培養條件等因素來優化細胞密度。3.使用合適的載體選擇合適的載體可以提高轉染效率和穩定性。常用的載體包括質粒、病毒和RNA。4.優化轉染條件優化轉染條件可以提高轉染效率和...

影響免疫組化（IHC）實驗結果的因素有哪些？

2023-10-08 免疫組化技術是利用已知的特異性抗體或抗原能特異性結合的特點，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結合部位確定組織細胞結構的一門組化技術。那么影響免疫組化實驗結果的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、組織的固定組織固定的好壞直接影響免疫組化的結果，選擇良好的固定液并及時充分的固定可以防止組織自溶，最大限度保留組織的抗原性，保證免疫組化結果的準確性。常用固定液：10%的中性緩沖福爾馬林（40%甲醛10ml+0.01mol/LPBS...

影響免疫熒光（IF）實驗結果的因素有哪些？

2023-10-08 免疫熒光染色技術是一種以免疫學為基礎，結合生物化學技術和顯微技術發展而來的蛋白等分子檢測技術。那么你知道影響免疫熒光（IF）實驗結果的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、免疫熒光染色方法的選擇免疫熒光染色技術分為直接法和間接法。直接法：將熒光標記物偶聯在抗原/抗體上，直接與相應的抗體/抗原反應。間接法：先用未標記的一抗與抗原充分反應后，再利用熒光標記的二抗與已經結合在抗原上的一抗結合，達到檢測抗原的目的。優點缺點直接法操作簡單、特異性高，非特異性染色少便于相同宿主來源的不同...