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    當前位置:首頁技術文章超濾離心管使用方法

    超濾離心管使用方法

    更新時間:2025-08-12點擊次數:1062

    超濾離心管操作指南:3大誤區毀樣本|附分子截留/離心參數對照表

    超濾回收率<50%?本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略,提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案!附轉速-分子量計算公式+堵膜急救方案。

    一、超濾管選型黃金法則(立即避坑)

    需求

    膜材質

    截留分子量

    代表產品

    蛋白濃縮

    再生纖維素

    10kDa

    Amicon® Ultra-4

    病毒純化

    PES

    100kDa

    Millipore UFC9100

    核酸回收

    低吸附PVDF

    30kDa

    Vivaspin® 20

    內毒素去除

    超低吸附

    3kDa

    Amicon® Ultra-15

    >??選錯致命傷:截留分子量>目標物樣本穿透丟失!

    二、操作流程(4步提升回收率至>90%

    Step1預處理(防膜失效關鍵?。?/span>

    1.離心管冰上預冷

    2.注入1ml預冷PBS

    3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

    Step2樣本加載

    參數

    標準值

    避坑要點

    最大裝載量

    80%管容積

    防溢出污染

    樣本粘度

    50cP(過高需稀釋)

    粘度檢測方法:移液器吸打阻力

    保留液體積

    ≥50μl(防干膜)

    定時觀察液面

    Step3離心程序(轉速/時間公式)

    ?離心力計算公式:

    RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

    r=離心半徑cm

    分子量-離心參數表:

    截留分子量

    推薦離心力

    時長

    3kDa

    4000g

    20-30min

    10kDa

    3500g

    15-25min

    50kDa

    3000g

    10-15min

    >??防過熱技巧:4℃離心+10min暫停降溫

    Step4樣本回收

    -正置法:直接吸取濃縮液(回收率80-90%

    -倒置法(高價值樣本):

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    三、3大高頻問題急救方案

    問題1:膜堵塞(流速驟降)

    -處理步驟:

    1.0.1MNaOH反向沖洗10min

    2.超純水沖洗3

    3.500g×5min低速離心疏通

     問題2:回收率低

    -根因排查:

    現象

    原因

    對策

    濾液渾濁

    膜破裂

    更換新管(勿超速)

    管壁掛液明顯

    疏水吸附

    預處理加 0.01% Tween-20

     

    問題3:濃縮倍數不足

    -科學濃縮比計算:

    ```

    濃縮倍數=初始體積/終體積

    (推薦≤10倍,防蛋白沉淀)

    ```

    -高倍濃縮技巧:分次添加樣本(維持液面高度)

    四、不同應用場景參數優化


    實驗目標

    關鍵參數調整

    回收率

    蛋白濃縮

    4℃ + 3500g × 15min

    92%

    緩沖液置換

    預裝新緩沖液 ×3

    99%

    脫鹽

    超純水稀釋 ×5

    98%

    外泌體純化

    100kDa + 3000g ×30min

    80%




    五、產品推薦

    密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司,歡迎咨詢。

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