磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么？

磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級(jí)磁珠微珠，這種磁珠微珠的表面標(biāo)記了一種對(duì)核酸有吸附作用的特定活性官能團(tuán)，能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng)，從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進(jìn)而獲得純化的核酸。那么磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、步驟

1、樣本處理：核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來(lái)。

（1）植物組織：液氮研磨或在特殊裂解液中電動(dòng)勻漿；

（2）動(dòng)物組織：液氮研磨或裂解液中手動(dòng)/電動(dòng)勻漿；

（3）血細(xì)胞：應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液處理；

（4）細(xì)胞：胰酶處理或蛋白酶K處理。

2、DNA純化：磁珠提前30min從冰箱拿出平衡。磁珠振蕩混勻，取處理完成的裂解液50μl中加入50μl磁珠懸液，按1:1充分混勻，室溫靜置5min，將懸濁液安放在磁力架上，靜置5min至上清清澈，去上清，用75%乙醇或80%乙醇200μl清洗沉淀（現(xiàn)用現(xiàn)配），旋轉(zhuǎn)ep管靜置30s，棄上清。重復(fù)清洗2次，干燥5~10min。

3、DNA溶出：待磁珠無(wú)乙醇味，從磁力架上取下ep管，用dH2O或TE溶出DNA，充分混勻，勿用槍頭刮蹭磁珠。靜置2min。再將ep管安放在磁力架上，上清清澈后吸取上清至新的ep管，即可得到DNA溶液。

二、注意事項(xiàng)

1.適用于大多數(shù)動(dòng)植物組織及培養(yǎng)細(xì)胞、全血、尤其適用于微量樣品的DNA提取，但對(duì)于裂解液過(guò)于粘稠的樣品不適用。

2.樣本處理時(shí)一定要快速，減少與空氣接觸發(fā)生降解；液氮的量也要適當(dāng)。

3.核酸如果不立即使用，則需至少在-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.震蕩混勻時(shí)一定要讓磁珠和液體充分接觸，使磁珠更好的吸附DNA。

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