RAW 264.7細胞復蘇

2024-10-16 要復蘇RAW264.7巨噬細胞，首先需要將含有1mL細胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中，然后將其轉(zhuǎn)移到1mL新鮮培養(yǎng)基的無菌管中，并ce底混合均勻。接下來，使用1000rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液倒掉，隨后再加入1mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞。將懸液加入含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中（10ml/10cm皿），并將其放置在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)（37℃，5%CO2）。第二天檢查細胞的生長狀態(tài)和密度，以確定是否需要進行傳代操作。通過這些步驟，可以有效地復蘇RAW26...

PCR-SBT基本原理

2024-10-15 1.PCR擴增PCR-SBT技術(shù)首先是對待測DNA進行PCR擴增，以擴增出分型區(qū)域。PCR，即聚合酶鏈反應，是一種在體外快速擴增特定DNA片段的方法。在PCR過程中，需要設計特定的引物，它們能夠與待擴增的DNA片段兩端互補結(jié)合。然后，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補配對的原則，合成新的DNA鏈。通過多次循環(huán)的變性、退火和延伸步驟，待測DNA片段得以大量擴增。在PCR-SBT技術(shù)中，為了擴增出HLA基因的多態(tài)性區(qū)域，通常需要設計多個引物對。這些引物對能夠覆...

三一造血人血小板裂解液說明書

2024-10-15 【產(chǎn)品名稱】中文名稱：三一造血人血小板裂解液英文名稱：HumanPlateletLysate(HPL)【貨號】RC-002【規(guī)格】100mL/瓶、500mL/瓶【性狀】本產(chǎn)品為橙黃色略渾濁的液體，久置或反復凍融后，渾濁現(xiàn)象更明顯，并有絮狀沉淀產(chǎn)生。【運輸條件】采用干冰冷凍運輸。【貯藏條件與有效期】-20°C保存即可，長期儲藏可置于-80°C條件下；建議收到本產(chǎn)品后，將本產(chǎn)品于4°C條件下放置過夜或37°C水浴0.5-1小時進行化凍，然后分裝凍存；利用本產(chǎn)品配制的wan全培養(yǎng)基...

感受態(tài)細胞制備原理與舉例

2024-10-14 一、感受態(tài)細胞即受體細胞通過理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)的細胞。二、感受態(tài)細胞制備原理將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫0℃預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹（滲透作用），同時，Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導細胞成為感受態(tài)細胞。大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞三、大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備實驗步驟實驗步驟一從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加...

PCR的提出和發(fā)展

2024-10-14 一、起源PCR的發(fā)明人，一般認為是穆里斯(K.Mullis)，他也因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。穆里斯在好些寫作中，包括1990年在《科學美國人》上的一篇文章，及1998年的自傳《心靈luo舞》(DancingNakedintheMindField)，都曾提到PCR這個構(gòu)想的起源。然而，PCR從構(gòu)想到實現(xiàn)，真的就是穆里斯一人之功嗎?PCR究竟是在什么樣的環(huán)境下誕生的呢?穆里斯的出身是生物化學家，1972在加州大學伯克利分校取得博士學位，專長有機合成。一早他就表現(xiàn)出桀驁不...

單克隆抗體vs多克隆抗體

2024-10-14 單克隆抗體與多克隆抗體在多個方面存在顯著的區(qū)別，這些區(qū)別包括它們的來源、特性、應用以及生產(chǎn)方式等。盡管單克隆抗體和多克隆抗體在特異性、穩(wěn)定性和生產(chǎn)方式等方面存在差異，但它們在許多情況下可以互補使用。一、定義與來源單克隆抗體：是指通過B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞系所產(chǎn)生的抗體。這種抗體是由單一的B細胞克隆產(chǎn)生的，因此具有高度均一性和特異性。它們通常是通過雜交瘤技術(shù)從動物細胞中獲得。多克隆抗體：則是從動物血清中獲得的抗體，屬于多種B細胞產(chǎn)生的混合物。這些抗體可以受到...

在基因操作中如何選用載體？

2024-10-12 ?在基因操作中選用載體的核心原則?是確保載體能夠滿足基因工程的基本要求，包括能夠在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定存在并復制、具有多個限制酶切點以便于目的基因的插入、帶有標記基因以便于篩選等?。圖為質(zhì)粒構(gòu)建基本流程在基因操作中選用載體的核心原則一?能夠自主復制?：確保載體在宿主細胞內(nèi)能夠自我復制，從而增加目的基因的數(shù)量?。在基因操作中選用載體的核心原則二?遺傳標記物?：載體應具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定?。在基因操作中選用載體的核心原則三?克隆位點?：載體應具有一個或多個特...

Transwell細胞遷移實驗注意事項

2024-10-12 Transwell細胞遷移實驗，也稱為Transwell遷移或侵襲測定實驗，是一種用于細胞生物學和分子生物學的實驗室技術(shù)，用于研究細胞通過多孔膜的運動。前面已經(jīng)講過實驗步驟，那實驗過程中需要注意些什么呢？注意事項一基質(zhì)膠在室溫下容易凝固，鋪膠過程全程需要在冰上操作。注意事項二基質(zhì)膠濃度也是影響細胞遷移和侵襲的因素之一，所以基質(zhì)膠的濃度和稀釋比例需根據(jù)供應商提供的信息和實驗具體情況調(diào)整，必要時可設置預實驗摸索最佳濃度和稀釋比例。一般常用濃度為1mg/mL。注意事項三鋪膠時，盡量...