蛋白質純化有哪些步驟呢？

2023-09-06 蛋白質純化是利用基因工程技術將編碼蛋白質的核酸序列導入宿主細胞，使其大量表達，然后采用合適的純化方法進行體外純化，以獲得高純度、高活性和高產量的蛋白質的過程。那么你知道蛋白質純化操作步驟嗎？讓我們一起來看看吧！1、構建原核表達質粒：目的基因PCR，載體酶切，連接，轉化，挑單克隆送測序；2、將構建成功的質粒轉化到BL21（DE3）中，37℃培養過夜，挑單克隆小搖過夜；3、小誘導摸索最佳誘導條件：將搖過夜的菌液1:1000接種到3mLLB中，37℃搖4-5h至菌液OD600=0....

如何區分非預染蛋白Marker和預染蛋白Marker？

2023-09-06 蛋白Marker是蛋白分子量標準，是一些已知分子量的蛋白質的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質條帶的大小。那么如何區分非預染蛋白Marker和預染蛋白Marker呢？讓我們一起來看看吧！非預染蛋白Marker：是幾種已知分子量并純化好的蛋白質預混液，方便不同大小的蛋白比較。非預染的Marker使用上不如預染Marker好用，因為電泳過程中完quan看不到，電泳結束后經過蛋白染色后才能起指示作用，無法在實驗過程中起預示參照作用，屬于“后知后覺”型的。但是由于蛋白沒有附帶染料分...

你知道如何正確使用移液槍嗎？

2023-09-04 移液槍是實驗室必*好工具，是檢驗人的好朋友，配質控、加樣都離不開移液槍的幫助，那么你知道怎么才能正確的使用移液槍嗎？讓我們一起來看看吧一、裝吸頭移液器套柄用力下壓，需要時小幅度旋轉即可。錯誤操作：用力敲擊吸頭。此方法會帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損，從而影響其密封性。不可以把槍頭提起來，再往下用力懟槍頭盒，這個非常錯誤二、吸頭浸入角度吸液時盡量保持垂直狀態，傾斜角度不能超過20°三、吸液速度勻速連貫吸液，控制好吸液速度，太快會造成噴液，液體或者氣霧沖入移液器內部，污染活塞等部...

你知道什么是ELISA嗎？

2023-09-04 酶聯免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理...

腺相關病毒（AAV）滴度快速檢測試劑盒的介紹

2023-09-01 腺相關病毒（adeno-associatedvirus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最jian單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。那么想要真正準確可靠地檢測腺相關病毒（AAV）滴度該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！AAV基因組為4.8kb的線狀單鏈DNA；AAV免疫原性低，基因持續表達半年以上；AAV具有多種血清型，可以特異性靶向感染不同的組織或器官，是動物活體基因轉導的shou選工具！腺相關病毒血清型眾多...

免疫熒光（IF）實驗常見問題有哪些？解決方案有什么？

2023-09-01 免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內的相應抗原（或抗體）。那么你知道在免疫熒光（IF）實驗中會遇到那些問題以及這些問題的解決方法嗎？讓我們一起來看看吧！問題一：目標蛋白熒光很弱，導致組間差異不顯著，導致假陰性結果解決方案：出現這種情況后，首先檢查抗體是否正確，是否適用于預處理的組織。有些抗體只適用于冰凍切片，但如果應用于石蠟切片，則會出現弱標記或無標記現象。然后通過文獻了解目的...

如何選擇熒光蛋白？

2023-08-31 熒光標記在生物學眾多的研究領域中有著十分廣泛的應用，已經成為研究體內或細胞成像及生物細胞功能的重要工具。熒光標記方式一般有兩種，一種是細胞表達的熒光蛋白，另外一種是化學合成的熒光分子，此外，螢光素酶也是細胞標記的常用方法。每一種熒光分子都有其獨te的激發波長和發射波長。螢光素酶不同于熒光分子，其發光機制是利用酶與底物的反應，催化發出的化學發光，其發光并不需要激發光的參與，常用于體內成像及螢光素酶報告基因的定量實驗。熒光蛋白如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、激發波長/發射波長...

DNA提取試劑盒，應該如何選？

2023-08-30 實驗室工作中，經常會需要用到純化的DNA，這時我們通常需要使用一個商業的DNA提取試劑盒對目的DNA進行分離純化。市面上有很多類型的提取試劑盒，當使用不太熟悉的樣本類型時，選擇合適的盒子是尤為關鍵的，應該如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實驗室培養的細胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋...