流式細(xì)胞分選抗體是種常用的細(xì)胞分選技術(shù),可以用于分離和純化復(fù)雜細(xì)胞混合物中的不同細(xì)胞亞群。FACS主要基于流式細(xì)胞儀和細(xì)胞表面標(biāo)記的抗體,通過細(xì)胞的免疫反應(yīng)來實現(xiàn)分選。
1.抗體選擇:抗體可以特異性地結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞表面的分子,如受體、細(xì)胞表面蛋白等。選擇抗體需要考慮到其特異性、親和性以及是否適用于實驗條件。
2.標(biāo)記抗體:為了識別目標(biāo)細(xì)胞,選擇的抗體需要標(biāo)記上可檢測物質(zhì),如熒光染料。常用的標(biāo)記物質(zhì)包括熒光染料、酶等。標(biāo)記抗體的選擇需要確保標(biāo)記物可以被流式細(xì)胞儀識別和檢測。
3.標(biāo)記細(xì)胞:將抗體標(biāo)記的目標(biāo)細(xì)胞與其他細(xì)胞混合,形成細(xì)胞懸浮液。通過孵育,讓抗體與細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合,將目標(biāo)細(xì)胞與其他細(xì)胞區(qū)分開來。
4.單細(xì)胞懸浮:將標(biāo)記后的細(xì)胞懸浮液通過微細(xì)孔篩網(wǎng),使得細(xì)胞以單個細(xì)胞的形式懸浮在懸浮液中。這樣能夠確保每個細(xì)胞的獨立性,使其能夠由流式細(xì)胞儀在分選過程中被準(zhǔn)確檢測。
5.流式細(xì)胞儀檢測:將單個細(xì)胞懸浮液通過流式細(xì)胞儀,儀器會以較高的速度將細(xì)胞一個接一個地通過光束,同時檢測每個細(xì)胞的熒光信號。根據(jù)抗體標(biāo)記的熒光信號的不同,可以確定細(xì)胞的類型和特征。
6.細(xì)胞分選:根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測到的熒光信號,將目標(biāo)細(xì)胞與非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分和分選。流式細(xì)胞分選通常根據(jù)熒光信號的強度來判斷細(xì)胞是否為目標(biāo)細(xì)胞,并根據(jù)設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞的篩選、分選和分離。
7.細(xì)胞收集:經(jīng)過分選后,目標(biāo)細(xì)胞會被分離和純化。通常是通過對視野內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步分選和收集,可以使用電場、壓力等手段對細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步分選和排列。
總結(jié)起來,流式細(xì)胞分選抗體原理主要包括抗體選擇、抗體標(biāo)記、標(biāo)記細(xì)胞、單細(xì)胞懸浮、流式細(xì)胞儀檢測、細(xì)胞分選和細(xì)胞收集等步驟。這些步驟的協(xié)同作用可以選拔出特定目標(biāo)細(xì)胞并實現(xiàn)高純度的細(xì)胞分選。