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更新時間：2025-07-01
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以下是 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑 的標準操作步驟（適用于貼壁細胞），操作前請確認細胞狀態、核酸純度及實驗條件適配性。
一、試劑準備
試劑名稱 | 要求 |
jetPRIME® | 使用前平衡至室溫，輕渦旋混勻（勿劇烈震蕩） |
核酸（DNA/siRNA） | 高純度（OD<sub>260/280</sub>≈1.8-2.0），無菌無內毒素，溶于無菌水或TE緩沖液 |
jetPRIME® Buffer | 提供無菌緩沖液（若試劑盒內含） |
細胞培養基 | 含血清 & 抗生素（轉染全程無需更換無血清培養基） |
二、 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑操作流程（24孔板為例）
Day 0: 細胞鋪板
1. 細胞計數：消化對數生長期細胞，調整密度。
2. 鋪板：
- 每孔加入 0.5~1×10? cells（貼壁細胞）
- 用 500μL wan-quan培養基（含10%血清+抗生素）培養。
- 關鍵：轉染時細胞密度需達 70~90% 匯合度（過度生長降低效率）。
Day 1: 轉染（耗時<15分鐘）
> ?? 所有步驟在無菌環境（超凈臺）操作，試劑室溫平衡。
步驟 | 操作 |
1. 稀釋核酸 | 取 1μg DNA（或 1.5~5nM siRNA）加入 200μL jetPRIME Buffer 中，輕混勻（如無Buffer可用無菌Opti-MEM替代）。 |
2. 加轉染試劑 | 向稀釋核酸中加入 2μL jetPRIME®（DNA:jetPRIME = 1μg:2μL）。 |
3. 混合孵育 | 立即渦旋10秒 → 室溫靜置10分鐘（溶液變渾濁屬正常現象）。 |
4. 加入細胞 | 將混合液 逐滴加入細胞孔，輕搖培養板混勻。 |
5. 繼續培養 | 放回37℃ CO<sub>2</sub>培養箱，無需更換培養基。 |
三、關鍵優化參數
變量 | 推薦條件 | 調整建議 |
細胞密度 | 70~90% 匯合度 | 過密→降低效率；過低→細胞毒性↑ |
DNA:jetPRIME比例 | 1μg DNA : 2μL 試劑（24孔板標準） | 按比例放大/縮小（如6孔板用4μg DNA+8μL試劑） |
siRNA用量 | 終濃度 10~50nM（參考細胞類型） | 敏感細胞從低濃度（10nM）起始測試 |
孵育時間 | 轉染后 24~72小時 檢測表達（峰值通常48h） | 熒光蛋白觀察24h，功能實驗需48~72h |
四、懸浮細胞轉染步驟
若轉染懸浮細胞（如Jurkat、THP-1）：
1. 離心收集細胞 → 重懸于 新鮮培養基（密度 0.5~1×10? cells/mL）。
2. 按 1mL細胞懸液 + 混合液（1μg DNA + 2μL jetPRIME） 加入EP管。
3. 輕柔混勻 → 37℃靜置 15~30分鐘 → 轉移至培養板繼續培養。
五、 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑使用注意事項
1. 細胞狀態：僅用健康、低傳代細胞（傳代<30）。
2. 試劑保存：jetPRIME® 4℃避光保存（非-20℃），保質期內穩定。
3. 避免污染：核酸和Buffer嚴格無菌操作。
4. 毒性處理：若細胞死亡率高：
- ↓ 降低jetPRIME用量（如1μg DNA用1.5μL試劑）
- ↓ 縮短轉染后培養時間（24h后換液）。
5. 對照設置：必設 空載體對照組 + 未轉染組。
六、Polyplus jetPRIME® 轉染試劑替代方案（特殊情況）
場景 | 替代方案 |
高難度細胞（原代、神經元） | 改用 jetOPTIMUS® |
體內轉染 | 搭配 in vivo-jetPEI® |
大片段DNA（>15kb） | 測試 jetPEI® |
問題排查：若效率低 → 檢查核酸純度、細胞密度、試劑比例；或聯系 polyplus代理——天津益元利康生物科技有限公司獲取技術支持。
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