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更新時(shí)間：2025-02-24
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簡(jiǎn)石TT2001酵母感受態(tài)制備與轉(zhuǎn)化試劑盒基于分子生物學(xué)"膜通透性-遺傳調(diào)控"雙效機(jī)制開發(fā)，適用于釀酒酵母、畢赤酵母等多種真菌的高效遺傳轉(zhuǎn)化。通過ISO/TC276標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證，單次反應(yīng)可實(shí)現(xiàn)1×10?–1×10? CFU/μg DNA的轉(zhuǎn)化效率，兼容環(huán)狀/線性DNA及未純化酶切產(chǎn)物。
化學(xué)誘導(dǎo)法（CaCl?/Mg2+體系）：通過低滲溶液誘導(dǎo)細(xì)胞膨脹，Ca2+與磷脂雙分子層作用形成孔道復(fù)合物，降低膜阻抗至<5 kΩ·cm2。
電穿孔法（兼容選項(xiàng)）：施加10-16 kV/cm電場(chǎng)，形成瞬時(shí)孔隙（10-100 nm），Zeta電位變化促進(jìn)DNA內(nèi)流。
酶活性平衡：轉(zhuǎn)化窗口期（0-30 min）限制性內(nèi)切酶活性抑制＞90%，DNA修飾酶效率提升至5.2 U/μg。
同步復(fù)制調(diào)控：誘導(dǎo)S期特異性啟動(dòng)子（如GAL1）激活，染色體凝集度降低40%，實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒高效復(fù)制。
樣本制備：
取OD600=0.6-0.8對(duì)數(shù)期酵母，冰上預(yù)冷15 min
加入Lambda DNA酶切液檢驗(yàn)?zāi)ね暾裕ê细駱颖綝NA結(jié)合率>85%）
感受態(tài)誘導(dǎo)：
化學(xué)法：100 mM CaCl?處理90 s（0-4℃），透射電鏡顯示膜流動(dòng)性提升38%
電轉(zhuǎn)法：0.2 cm電擊杯1.8 kV脈沖（時(shí)間常數(shù)4.5-5.5 ms）
轉(zhuǎn)化步驟：
DNA與細(xì)胞冰浴共孵育20 min
42℃熱激90 s（化學(xué)法）或直接復(fù)蘇（電轉(zhuǎn)法）
30℃選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h
| 參數(shù) | 測(cè)試結(jié)果 | 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn) |
|---|---|---|
| 轉(zhuǎn)化效率 | 1.2×10? CFU/μg pYES2 | GB/T 37877-2019 |
| 細(xì)胞存活率 | 92.3±3.5% | CCK-8法 |
| 線性DNA兼容性 | ≥80%環(huán)狀DNA效率 | 1 kb同源臂測(cè)試 |
| 凍存穩(wěn)定性（-80℃） | 6個(gè)月效率衰減＜5% | ISO 13485 |
未誘導(dǎo)細(xì)胞：4℃ PBS懸浮保存≤72 h
感受態(tài)細(xì)胞：-80℃甘油保護(hù)液保存，建議分裝為50 μL/管
注意事項(xiàng)：
避免反復(fù)凍融（每次凍融轉(zhuǎn)化效率下降15-20%）
運(yùn)輸過程需用干冰維持-60℃以下低溫鏈
疑難樣本處理：纖維素酶預(yù)處理（5 U/mL，30 min）可提升絲狀真菌轉(zhuǎn)化效率
大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（＞15 kb）：添加100 μM DTT及5% PEG4000增強(qiáng)DNA穩(wěn)定性
自動(dòng)化適配：兼容Beckman Biomek i7工作站液體處理系統(tǒng)
簡(jiǎn)石感受態(tài)細(xì)胞代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營(yíng)的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
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