懸浮細胞的轉染

更新時間：2025-02-06

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一、懸浮細胞都有什么？

懸浮生長的細胞是指在體外培養時不依賴于支持物表面，而是在培養液中以懸浮狀態生長的細胞。這類細胞通常來源于血液、淋巴組織，例如某些腫瘤細胞和轉化細胞。懸浮細胞的特點是細胞呈圓形，一般不貼于支持物上，易于大量繁殖。在體外培養的細胞類型中，懸浮細胞可以呈單個細胞或細小的細胞團生長。

以下是一些常見的懸浮生長細胞類型：

小鼠腹水瘤 S180

小鼠骨髓瘤 NS1 和 SP2/0

人造血系腫瘤細胞 U937、HL60、K562

人原髓細胞白血病細胞 HL-60

小鼠白血病細胞 WEHI-3

人白血病細胞 K-562

此外，還有一些工業上應用的細胞系，如 CHO、BHK、HEK293 等，這些細胞主要用于重組蛋白質生產。在獸用生物制品中，常用的懸浮培養的細胞系包括 BHK21 和 MDCK 細胞。

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二、懸浮細胞的轉染

1.提一天將細胞接種6孔板，每孔細胞數約為3×105 個，
2.第二天，換液后加入1mL培養基，再加20 μL 慢病毒，
3.混勻后繼續培養，
4.12h后觀察細胞狀態，并更換為新鮮培養基，
5.轉染1周后，觀察細胞生長情況，中途可以換液，保持細胞的活性。
轉染（Transfection）是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。轉染的目的是產生重組蛋白，或特異性增強或抑制轉染細胞中的基因表達。細胞轉染有哪些類型和方法呢？

1）根據導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可以分為瞬轉和穩轉。

瞬轉	穩轉
導入的DNA沒有整合到基因組中，而是保留在細胞核上	導入的DNA整合到基因組中
導入的遺傳物質不傳遞到子代；遺傳改變只是暫時的	導入的遺傳物質能夠代代相傳；遺傳改變是的
不需要選擇性篩選	需要選擇性篩選出穩定轉染的細胞
DNA載體和RNA都可用于瞬時轉染	只有DNA載體可用于穩定轉染；RNA本身不能穩定地導入細胞中
導入的遺傳物質的高拷貝數導致高水平的蛋白質表達。	單拷貝數或低拷貝數的穩定整合的DNA導致較低水平的蛋白質表達。
通常在轉染后24-96小時內收獲細胞。	需要2-3周的時間篩選出穩定轉染的細胞克隆。
通常不適合使用具有誘導型啟動子的載體的研究。	適用于使用帶有誘導型啟動子的載體的研究。

2）根據轉染方式可以分為化學，生物，物理方法。

轉染類型	轉染方法	原理	應用	特點
化學轉染法	磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞	穩轉，瞬轉	不適用于原代細胞，操作簡便但重復性差，有些細胞不適用
	陽離子脂質體法	帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞	穩轉，瞬轉所有細胞	適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大
	DEAE-右旋糖苷法	帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞	瞬轉	相對簡便、結果可重復，但對細胞有一定的毒副作用，轉染時需除血清
生物轉入法	病毒介導法	通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	穩轉	可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等
	逆轉錄病毒		特定宿主	但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素
	腺病毒	通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	瞬時轉染特定宿主	可用于難轉染的細胞需考慮安全因素
物理轉染法	Biolistic顆粒傳遞法	將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放表達	瞬轉	可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞
	電穿孔法	高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入	穩轉，瞬轉所有細胞	適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大
	顯微注射法	用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核	穩轉，瞬轉	轉染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

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