明明凍存的時候細胞長得好好的，怎么一復蘇就完啦？

更新時間：2025-01-21

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不知道大家是否會遇到細胞凍存的時候狀態非常不錯，結果等到需要用到該細胞的時候怎么也復蘇不起來的情況啊？或許可能是凍存細胞的時候出現了什么差錯？

一.細胞凍存的原則：慢凍，細胞在冷凍過程中，如果降溫過快，會形成大的冰晶，這些冰晶會破壞細胞結構，導致細胞死亡。

詳細版本見《細胞凍存的原理是什么？》

二.凍存液的配置：

常用配置比例：培養基:血清:DMSO=7:2:1

適用于大多數細胞系，能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。

血清:DMSO=9:1

適用范圍：適用于需要長時間保存或者具有特別珍貴性的細胞系。血清含量高，可以更好地保護細胞，并確保其在凍存后依然保持較好的生物學特性。

無血清凍存液：適用于某些對血清敏感或需要避免血清成分的細胞系。配置比例：如10% DMSO+90%專用無血清培養基，或其他適合細胞生長的無血清替代品。

凍存注意事項！！！

詳細版本見《細胞凍存的注意事項》

1.不要將DMSO直接加入含有細胞的培養基中，因為DMSO溶于培養基時會釋放大量熱量，可能燙傷細胞。在加入細胞前，可以將配置好的凍存液放于4℃進行預冷（預冷步驟并非必需)。DMSO在4°C時毒性會大大減弱，且滲透速度加快，有助于保護細胞。

2.若使用凍存盒進行凍存，必須將凍存盒解凍至室溫（避免溫度驟變對細胞的損傷：如果直接將冷凍的凍存盒從低溫環境取出，并立即打開或處理，細胞會受到溫度驟變的影響。

溫度的急劇上升可能導致細胞內冰晶的形成或擴大，對細胞膜和細胞器造成機械性損傷，進而影響細胞的存活率。)

3.把握細胞凍存的密度：應確保細胞處于對數生長期，形態正常，無污染，且細胞密度足夠大，因為凍存和復蘇的過程中不可避免會導致部分細胞死亡。

細胞凍存的步驟：

詳細版本見《細胞凍存的實驗步驟》

1.配置好細胞凍存液，置于4℃預冷備用

2.將待凍存的細胞從培養箱中取出，棄去舊的培養基，PBS洗滌，對于貼壁細胞，加入適量胰酶消化液，將培養皿放入37℃培養箱中消化數分鐘（消化時間根據細胞類型而定）當觀察到細胞大塊大塊地從皿底脫落時，加入等體積的wan全培養基終止消化。離心收集細胞；對于懸浮細胞直接離心收集

3.向離心管中加入適量的凍存液，用移液器輕輕吹打細胞沉淀，使細胞均勻懸浮于凍存液中。

4.將重懸后的細胞懸液分裝至無菌凍存管中，凍存管放入-80過夜，次日轉移置液氮保存。

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