常見的細胞凋亡檢測方法

　　細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束生命，最后裂解為若干凋亡小體，被其他細胞吞噬的過程，也稱為程序性細胞死亡。細胞凋亡是多細胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育、維護內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方式，凋亡過程是由基因控制的細胞主動死亡過程。那么你知道常見的細胞凋亡檢測方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、基于生物學功能的方法：
 

　　1.Annexin V/PI檢測磷脂酰絲氨酸 (PS)
 

　　在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)位于細胞膜內(nèi)側(cè)；細胞凋亡早期，PS會從細胞膜胞質(zhì)外翻到細胞膜外側(cè)。Annexin V (膜聯(lián)蛋白V)是一種Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與外翻的PS特異性結(jié)合，因此Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI) 染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色核酸染料，可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。
 

　　Annexin V 經(jīng)熒光素標記后作為熒光探針，如Annexin V-FITC ，與PI聯(lián)合(凱基貨號：KGA107)染色后，正常細胞基本無熒光(Annexin V-/PI-)，早期凋亡細胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光(Annexin V+/PI+)。借助流式細胞術(shù)即可檢測細胞的凋亡情況。此外，除了用FITC標記Annexin V 之外，也可以用EGFP、PE、APC、mCherry等作為熒光探針，也可以用7-AAD來替代PI作為核酸染料。
 

　　2.JC-1檢測線粒體膜電位凋亡早期細胞，線粒體膜通透性增加，線粒體膜電位(ΔΨm)下降甚至消失。線粒體膜電位的下降被認為是細胞凋亡過程中最早發(fā)生的生物學變化。一旦線粒體膜電位被破壞，細胞凋亡將不可逆轉(zhuǎn)。
 

　　二、基于生化標記的方法：
 

　　1.TUNEL法檢測DNA片段原位
 

　　細胞凋亡形成的DNA斷裂會暴露DNA鏈的3’-OH末端，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)可催化斷裂DNA的3′-OH端的核酸聚合反應，加入帶有熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標記的dUTP，顯色反應后可特異地進行原位凋亡細胞的檢測。正常或增殖細胞幾乎沒有DNA的斷裂，故很少被染色。TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(凱基貨號：KGA7072)適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或激光共聚焦等成像設備檢測到凋亡細胞。
 

　　2.彗星電泳檢測DNA片段化
 

　　彗星電泳實驗的原理：當各種內(nèi)源性和外源性因素誘發(fā)細胞DNA鏈斷裂時，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進入凝膠而留在原位。詳細操作和數(shù)據(jù)分析可參考干貨|彗星電泳法檢測DNA損傷-從實驗到數(shù)據(jù)分析。
 

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