提取DNA方法的優(yōu)缺點(diǎn)，你知道嗎？

目前比較常用的提取DNA的方法有：苯酚氯仿抽提法、離心柱法和磁珠法，提取DNA的這些方法有哪些優(yōu)缺點(diǎn)呢？你都知道嗎？讓小編帶你來(lái)看看吧！

一、苯酚氯仿抽提法

苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質(zhì)的變性劑，反復(fù)抽提，使蛋白質(zhì)變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)將細(xì)胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質(zhì)或多肽或小肽分子，變性降解核蛋白，使DNA從核蛋白中游離出來(lái)。而DNA易溶于水，卻不溶于有機(jī)溶劑。

蛋白質(zhì)分子表面帶有親水基團(tuán)，也容易進(jìn)行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質(zhì)分子能順利地進(jìn)入到水溶液中形成穩(wěn)定的膠體溶液。當(dāng)有機(jī)溶液存在時(shí)，蛋白質(zhì)的這種膠體穩(wěn)定性遭到破壞，變性沉淀。離心后有機(jī)溶劑在試管底層(有機(jī)相)，DNA存在于上層水相中，蛋白質(zhì)則沉淀于兩相之間。利用萃取原理，根據(jù)蛋白核酸溶于不同的試劑層，將槍頭伸入不同液層內(nèi)抽取所需的成分，經(jīng)多次洗滌后獲得純化核酸。

該方法的缺點(diǎn)是由于使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長(zhǎng)時(shí)間操作對(duì)人員健康有較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由于操作體系大，不同實(shí)驗(yàn)人員操作重復(fù)性差，不利于保護(hù)RNA，很難進(jìn)行微量化的操作。  優(yōu)點(diǎn)是采用了實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的試劑和藥品，做起來(lái)成本比較低廉。

二、離心柱法

離心柱法主要原理是將對(duì)核酸有吸附作用的官能基團(tuán)固定在離心柱模上，通過(guò)加入不同的裂解試劑、洗滌試劑并反復(fù)離心，以達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，獲得純化的核酸。離心柱法DNA提取它的優(yōu)點(diǎn)是比傳統(tǒng)的酚氯法提取的純度高，有利于RNA保護(hù)，而且能進(jìn)行微量操作，以其低廉的價(jià)格和相對(duì)便捷的操作，漸逐取代了傳統(tǒng)DNA提取方法，被高校科研所等市場(chǎng)普遍接受。

離心柱法DNA提取的缺點(diǎn)是需要較多的樣本，耗材多，對(duì)于zhen稀樣本無(wú)能為力，特別是在法醫(yī)、考古等領(lǐng)域顯得力不從心。同時(shí)離心柱法DNA提取需要反復(fù)離心，不便于高通量、自動(dòng)化操作，與現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的高通量、自動(dòng)化要求格格不入，特別是在基因診斷、疾病檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)等領(lǐng)域，離心柱法DNA提取需要大量的操作人員及儀器設(shè)備。當(dāng)面對(duì)突發(fā)疫情時(shí)，更是需要有高通量的DNA提取設(shè)備與方法才能更有效準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)疫情、控制疫情。為此需要一種新的DNA提取方法解決這個(gè)實(shí)際難題。在這個(gè)時(shí)代潮流需求的驅(qū)動(dòng)下，磁珠法DNA提取應(yīng)運(yùn)而生。

三、磁珠法

磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對(duì)核酸有吸附作用的特定活性官能基團(tuán)，通過(guò)不同的裂解液結(jié)合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合，同時(shí)利用磁珠自身的磁性，在外磁場(chǎng)的作用下可以方便的實(shí)現(xiàn)定向移動(dòng)與富集，從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的分離純化，獲得純化核酸。

磁珠法是納米科技與生物技術(shù)的wan美結(jié)合，具有其他DNA提取方法無(wú)fa比擬的優(yōu)勢(shì)，主要體現(xiàn)在：

a.能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作，配合96孔的核酸自動(dòng)提取儀，在以往做一個(gè)樣品的提取時(shí)間內(nèi)可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)96個(gè)樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當(dāng)前生物學(xué)高通量操作的要求，使得在大規(guī)模疫情爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速篩查原因，這個(gè)優(yōu)點(diǎn)是其他方法難以趕超的。

b.操作簡(jiǎn)單、用時(shí)短，整個(gè)提取流程只有裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四步短時(shí)間內(nèi)即可完成。

c.安全無(wú)毒，不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害少，保護(hù)了實(shí)驗(yàn)人員的身體健康。

d.磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。

e.靈敏度高，適合法醫(yī)樣本等痕量DNA提取。

隨著當(dāng)代生物學(xué)的高速發(fā)展及核酸提取儀的大量普及，為了滿足時(shí)代要求，吉恩特生物專業(yè)研制磁珠法DNA提取，并開(kāi)發(fā)了多系列磁珠法DNA提取的系統(tǒng)化方案，為廣大科研工作者提高試驗(yàn)效率，簡(jiǎn)化試驗(yàn)過(guò)程提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持和產(chǎn)品保障，磁珠法DNA提取也將成為現(xiàn)代分子生物學(xué)的主流。

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