用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC抗體有哪些區別？

用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC實驗的抗體有哪些區別？今天我們一起學習一下吧！

WB（western blot，蛋白質印跡）：是生命科學領域實驗中一種非常常見的分子生物學實驗技術，其原理是先利用SDS-PAGE將蛋白質進行分離，接著將蛋白質轉移到膜上，然后再利用抗體進行蛋白質檢測。通過分析條帶大小和顯色信號獲得目標蛋白質在細胞或組織樣本中的表達情況。在實驗過程中由于蛋白質在電泳前進行了加熱變性，破壞了保持蛋白質二級和三級結構的氫鍵，從而使得蛋白質發生了線性化，需要使用識別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般選用人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。

IHC(immunohistochemical，免疫組化)：是通過抗原抗體特異性免疫反應和化學/熒光呈色反應，利用標記抗體對細胞或組織內的抗原進行研究的技術。在進行免疫組化實驗過程中需要將組織或者細胞進行固定，以維持細胞的形態結構和天然狀態下的一致，確保組織細胞抗原特異性的穩定。但化學物質的固定會使蛋白質變性，與天然狀態下的蛋白質結構會存在有一定的區別，而又不同于WB中加熱變性變成線性的結構。

免疫組化抗體識別的是未經加熱變性處理的抗原表位，有的屬于構象型，有的屬于線性的，構象型表位由于受蛋白空間結構限制，加熱變性會消失，而線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF實驗中，最合適是用重組蛋白作為抗原制備出來的抗體，除此之外也可以是人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。如果所用的抗體識別的是線性表位(例如識別蛋白上連續的幾個氨基酸)那么這種抗體則可以同時用于IHC和WB，而如果抗體識別的是構象表位，則只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通過抗原抗體特異性反應來純化富集樣品中的目的蛋白的一種方法。一般情況下是使目的蛋白與其對應的抗體(protein A/G)形成免疫復合物沉淀而被收集。根據檢測目標的不同可以將IP技術分為以下3種：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技術富集蛋白后檢測與其結合的DNA的量；RIP是檢測與其結合的RNA的量；Co-IP則是檢測與其結合的蛋白質的量。

免疫沉淀是用抗體去識別結合自然狀態下的蛋白質，因此做IP實驗時抗體最好選擇由天然蛋白作為抗原制備出來的抗體，當然也可以選擇由重組蛋白作為抗原制備的抗體，注意最好不要選擇由人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因為這種抗體識別的位點有可能包裹在蛋白內部而無法識別。

FC(flowcytometry，流式細胞術)：是以IF為基礎發展起來的一種專門的細胞分析技術，主要用于細胞的分選。流式細胞中分為兩種，一種是將細胞固定之后的流式，在選用抗體時保持與IF/IHC 一致即可；另外一種是活細胞的流式，這種流式最好采用由重組蛋白作為抗原制備出來的抗體或者采用由天然蛋白作為抗原制備的抗體。

在做流式細胞實驗中由兩種標記方法，直接標記法和間接標記法。使用直接標記法時應選擇帶有熒光標記的一抗；如果研究的蛋白沒有直接標記的一抗，則需使用間接標記法，在使用間接標記法的過程中需注意要同時使用可識別靶標抗原一抗和偶聯熒光染色的二抗。

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