PCR/qPCR耗材選擇——材料及顏色篇

目前市場(chǎng)上大多數(shù)PCR/qPCR管材選用的是聚丙烯材料。聚丙烯是一種惰性的有機(jī)材料，對(duì)反應(yīng)物質(zhì)的吸收值最小，并且聚丙烯可以承受PCR過(guò)程中的溫度變化，在經(jīng)過(guò)溫度變化后不易變形，因此可以確保獲得最佳的PCR結(jié)果。

在生產(chǎn)過(guò)程中，為了保證生物兼容性、純度以及批次間的一致性，應(yīng)當(dāng)使用全新的醫(yī)學(xué)級(jí)的分子生物學(xué)級(jí)別的高品質(zhì)的聚丙烯作為原料進(jìn)行生產(chǎn)。有些PCR / qPCR板為了配合高通量機(jī)器人的操作，需要具有更高強(qiáng)度的邊框來(lái)配合機(jī)器人的抓取，通常情況下邊框的材料使用的是更高強(qiáng)度的聚碳酸酯。

在某些PCR過(guò)程中，如數(shù)字PCR，對(duì)于耗材的選擇更為嚴(yán)苛。由于數(shù)字PCR使用的是有限稀釋檢測(cè)法，因此在操作配樣的過(guò)程中如果樣品吸附在槍頭或管壁上，將會(huì)造成樣本的缺失，從而造成結(jié)果的偏差。對(duì)于樣本稀缺且珍貴的實(shí)驗(yàn)中，低吸附度的耗材可以減少材料的損耗，并且可以保證PCR實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。因此低吸附度的耗材贏得了研究學(xué)者的青睞。

PCR管/板有多種顏色，如透明色、白色、黃色、藍(lán)色、紅色……普通的PCR過(guò)程中，管/板的顏色并不會(huì)影響PCR的結(jié)果，但是在qPCR中，管/板的顏色對(duì)于結(jié)果是有很大的影響的。

應(yīng)用于qPCR的耗材，一般是白色或者磨砂的塑料耗材。qPCR在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量，因此與透明塑料管/板相比，白色或磨砂的管/板在應(yīng)對(duì)熒光時(shí)表現(xiàn)更為靈敏，并且結(jié)果更加準(zhǔn)確。這是因?yàn)榘咨暮牟目梢宰柚篃晒庹凵涑龉埽_(dá)到熒光折射的最小化，將更多的熒光信號(hào)反射回檢測(cè)器，從而增加信噪比，表現(xiàn)為更高的靈敏度；另外，白色管壁也可阻止熒光信號(hào)被PCR儀的加熱模塊吸收或進(jìn)一步反射，從而可以降低重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的誤差，提高準(zhǔn)確性。除此之外，在進(jìn)行qPCR時(shí)需使用超透明的管蓋或光學(xué)密封膜來(lái)密封PCR管/板，保證熒光不受干擾；還需要參考qPCR的耗材要求，選擇最合適的耗材，達(dá)到想要的實(shí)驗(yàn)效果。